5-杂氮-2’-脱氧胞苷对人结直肠癌HCT116细胞KISS1基因表达及侵袭迁移的影响

【摘要】 目的:应用甲基化转移酶抑制剂5-杂氮-2’-脱氧胞苷(5-aza-2’-deoxycytidine,5-Aza-dC)干预人结直肠癌HCT116细胞,分析KISS1基因启动子甲基化与KISS1表达的关系及对细胞生物学特性的影响。方法:分别采用甲基化特异性-PCR、实时荧光定量-PCR和蛋白质印迹法检测不同剂量的5-Aza-dC干预不同时间后HCT116细胞中KISS1基因启动子的甲基化状态、mRNA和蛋白表达的影响;并应用Transwell小室法检测细胞侵袭和迁移能力的变化,细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)法检测细胞增殖能力的变化。结果:5-Aza-dC干预后,HCT116细胞KISS1基因启动子甲基化转为阴性。5-Aza-dC干预5 d后,各个浓度处理组KISS1 mRNA及蛋白的表达量均较对照组有明显增高(P<0.05),且随着浓度的增加,mRNA和蛋白的表达量逐渐上调,但5μmol/L组与10μmol/L组之间,差异无统计学意义(P>0.05);干预后各组细胞的侵袭和迁移能力也较对照组明显下降(P<0.05)。结论:DNA甲基化转移酶抑制剂5-Aza-dC能够逆转KISS1基因启动子的甲基化,并通过上调KISS1基因表达抑制结直肠癌HCT116细胞的侵袭和迁移能力。

【作者】 陈绍勤； 陈志华； 林素勇； 戴起宝；